การแสดงออกของยีนบีตา-ไซโลสิเดสของ Streptomyces sp. CH7 ใน Escherichia coli และลักษณะสมบัติของเอนไซม์

โตมร ทองน้ำวน

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10427

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	ไพเราะ ปิ่นพานิชการ	-
dc.contributor.author	โตมร ทองน้ำวน	-
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์	-
dc.date.accessioned	2009-08-25T07:29:29Z	-
dc.date.available	2009-08-25T07:29:29Z	-
dc.date.issued	2545	-
dc.identifier.isbn	9741711727	-
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10427	-
dc.description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2545	en
dc.description.abstract	ยีนบีตา-ไซโลสิเดสของ Streptomyces sp. CH7 ในรีคอมบิแนนท์พลาสมิด pCH7-1 สามารถแสดงออกได้ใน E. coli สายพันธุ์ DH5[alpha] ที่ไม่ต้องการการชักนำใกล้เคียงกับสายพันธุ์ JM109 ที่ชักนำด้วย 0.2 มิลลิโมลาร์ IPTG และยังพบว่าไซแลนเป็นแหล่งคาร์บอนที่มีผลเพิ่มประสิทธิภาพการแสดงออกของยีน ขณะที่ไซโลสและกลูโคสยับยั้ง ส่วนระยะเวลาที่เหมาะสมในการเลี้ยงเชื้อเพื่อให้แอคติวิตีจำเพาะของเอนไซม์สูงสุดคือ 15 ชั่วโมง เมื่อนำเอนไซม์ที่ได้จากการแสดงออกของยีนนี้มาทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีคอลัมน์โครมาโทกราฟีบน DEAE-Biogel A และ Sephadex G-200 พบว่ามีรูปแบบการทำให้บริสุทธิ์คล้ายคลึงกับเอนไซม์ที่ได้จากสายพันธุ์เดิม นอกจากนี้ยังพบว่าเอนไซม์มีอุณหภูมิและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมในการทำงาน และความเสถียรต่ออุณหภูมิและความเป็นกรดด่างเช่นเดียวกับบีตา-ไซโลสิเดสจากสายพันธุ์เดิม เอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 178,000 ดาลตัน เมื่อวิเคราะห์โดลเจลฟิลเตรชันและประกอบด้วย 2 หน่วยย่อยที่มีน้ำหนักเท่ากันคือประมาณ 75,000 ดาลตัน จากการหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นดีเอ็นเอที่โคลนได้ในรีคอมบิแนนท์พลาสมิด pCH7-1 พบกรอบอ่านรหัสเปิดสมบูรณ์ 1 กรอบ ที่ลำดับนิวคลีโอไทด์ 552 ถึง 2927 และแปลเป็นกรดอะมิโนได้ 792 กรดอะมิโน ซึ่งคำนวณเป็นน้ำหนักโมเลกุลได้ 83,386 ดาลตัน	en
dc.description.abstractalternative	beta]-Xylosidase gene of Streptomyces sp. CH7 in the recombinant plasmid pCH7-1 has comparable expression ability either in E. coli strains DH5[alpha] without induction or JM109 induced with 0.2 M IPTG. Furthermore, its expression ability was increased by xylan but repressed by glucose and xylose when used as a carbon source for cultivation. The optimal cultivation time giving maximum enzyme specific activity was 15 h. Purification of [beta]-xylosidase from the recombinant E. coli by column chromatography on DEAE-Biogel A and Sephadex G-200 gave similar purification patterns to that of the enzyme from the wild type. The purified enzyme had pH and temperature optimum including its stability to pH and temperature properties similar to that of the wild type. It had molecular weight of 178,000 Da estimated by gel filtration and consisted of 2 identical subunits with molecular weight of 75,000 Da. From the nucleotide sequence analysis of the DNA insert in the recombinant plasmid pCH7-1, it showed one complete open reading frame from nucleotide numbers 552 to 2927 encoding 792 amino acids with calculated molecular weight of 83,386 Da.	en
dc.format.extent	852219 bytes	-
dc.format.mimetype	application/pdf	-
dc.language.iso	th	es
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.subject	บีตา-ไซโลสิเดส	en
dc.subject	สเตรปโตมัยซิส	en
dc.subject	ไซลีน	en
dc.subject	การแสดงออกของยีน	en
dc.title	การแสดงออกของยีนบีตา-ไซโลสิเดสของ Streptomyces sp. CH7 ใน Escherichia coli และลักษณะสมบัติของเอนไซม์	en
dc.title.alternative	Expression of Beta-xylosidase gene of Streptomyces sp. CH7 in Escherichia coli and characterization of the enzyme	en
dc.type	Thesis	es
dc.degree.name	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต	es
dc.degree.level	ปริญญาโท	es
dc.degree.discipline	จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม	es
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.email.advisor	ppairoh@chula.ac.th	-
Appears in Collections:	Sci - Theses

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
tomorn.pdf		832.25 kB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record