Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/11219
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisorSomying Tumwasorn-
dc.contributor.advisorNibondh Udomsantisuk-
dc.contributor.authorAjcharaporn Sawatpanich-
dc.contributor.otherChulalongkorn University. Graduate School-
dc.date.accessioned2009-09-22T04:12:54Z-
dc.date.available2009-09-22T04:12:54Z-
dc.date.issued1998-
dc.identifier.isbn9743320202-
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/11219-
dc.descriptionThesis (M.Sc.)--Chulalongkorn University, 1998en
dc.description.abstractM. pneumoniae is a causative agent of human respiratory tract, especially in children and young adults. Clinical diagnosis cannot be differentiated from infection caused by other bacteria or viruses. The rapid method for diagnosis of M. pneumoniae infection is important for effective treatment and the prevention of severe complications. This study was designed to evaluate nested polymerase chain reaction (nested-PCR) assay by the use of two sets of primers for detection of M. pneumoniae in clinical samples. Primers were selected from the gene encoding P1 protein (MP-primer) which is responsible for cell adherence, and a fragment of 16S rRNA gene (16S rDNA primer) which is highly conserved in cell. The false-positive due to amplicon carryover was prevented by the enzymatic degradation procedure with the use of uracil-N-glycosylase (UNG). The sensitivity for detection of purified M. pneumoniae DNA for MP-and 16S rDNA-nested PCR was 1 fg and 0.1 fg, respectively. Throat swab specimens obtained from 100 patients with respiratory complaints and 100 healthy volunteers were subjected to nested-PCR. The results of PCR were compared to those obtained by culture, and serologic testing by micorparticle agglutination. In patients, PCR detected M. pneumoniae DNA in 4 adults and 3 children who were all seropositive, except in one adult. This patient had seronegative result in the first serum but the second serum was not available for detecting rising in antibody titer. M. pneumoniae DNA was not detected in healthy volunteers. Antibody titers of <1:40, 1:40 and 1:80 were found in 81, 9, and 10 healthy volunteers, respectively. PCR inhibitors were detected in 20% of all samples : after dilution of these samples, all samples were reactive. Colonies of live M. pneumoniae were not detected on modified Hayflick agar plate by culture. The results suggest that MP- and 16S rDNA-nested PCR were sensitive, reliable, and suitable for rapid detection of M. pneumoniae in respiratory tract samples of patients with respiratory complaintsen
dc.description.abstractalternativeMycoplasma pneumoniae เป็นเชื้อก่อโรคที่สามารถพบได้ในผู้ป่วยที่มีการติดเชื้อในระบบทางเดินหายใจ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเด็กและวัยหนุ่มสาว การวินิจฉัยทางคลินิกแต่เพียงอย่างเดียว ไม่สามารถบอกความแตกต่างของการติดเชื้อนี้ออกจากการติดเชื้อแบคทีเรียอื่นหรือการติดเชื้อไวรัสได้ ดังนั้นวิธีการวินิจฉัยเชื้ออย่างรวดเร็วจึงมีความสำคัญ เพื่อให้การรักษาเป็นไปอย่างถูกต้องและสามารถป้องกันการเกิดโรคแทรกซ้อนที่รุนแรงได้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินค่าการใช้วิธี nested polymerase chain reaction (NPCR) สำหรับการตรวจหา M. pneumoniae ในสิ่งส่งตรวจ โดยใช้ primer 2 ชุด primer ชุดที่ 1 (MP-primer) จำเพาะสำหรับยีนที่ควบคุมการสร้างโปรตีน P1 ซึ่งเป็นโปรตีนที่ทำหน้าที่เกี่ยวข้องกับ การยึดเกาะเซลล์ primer ชุดที่ 2 (16S-rDNA primer) จำเพาะกับยีนที่ควบคุมการสร้าง 16S rRNA นอกจากนี้ได้มีการนำเอนไซม์ uracyl-N-glycosylase (UNG) มาใช้เพื่อเป็นการป้องกันการเกิดผลบวกปลอม เนื่องจากการปนเปื้อนจาก PCR product (amplicon carryover) ผลการทดลองพบว่า MP-nested PCR สามารถตรวจพบ DNA ของ M. pneumoniae ได้ในปริมาณต่ำสุด 1 fg และ 16S rDNA-nested PCR ตรวจพบได้ในปริมาณต่ำสุด 0.1 fg การใช้ nested PCR ตรวจหา DNA ของเชื้อ M. pneumoniae จากตัวอย่างที่ป้ายจากคอผู้ป่วย (throat swab) ที่มีการติดเชื้อของระบบทางเดินหายใจจำนวน 100 ราย และกลุ่มควบคุม 100 ราย พบว่าเมื่อเปรียบเทียบผลของ PCR กับการเพาะเชื้อ และการทดสอบทางน้ำเหลืองด้วย microparticle agglutination assay วิธี nested PCR สามารถตรวจพบ DNA ของเชื้อ M. pneumoniae จาก throat swab ของผู้ป่วยผู้ใหญ่จำนวน 4 ราย ซึ่งการทดสอบทางน้ำเหลืองให้ผลบวกทุกราย ยกเว้นในผู้ใหญ่ 1 ราย ที่ผลการตรวจทางน้ำเหลืองครั้งแรกให้ผลลบ แต่ไม่สามารถเก็บตัวอย่างในครั้งที่สองมาตรวจหาการเพิ่มขึ้นของแอนติบอดีได้ การทดสอบในกลุ่มควบคุมปรากฏว่าไม่พบ DNA ของ M. pneumoniae จากการตรวจด้วยวิธี PCR ผลการตรวจน้ำเหลืองพบว่ามีระดับแอนติบอดีน้อยกว่า 1:40, 1:40 และ 1:80 ในจำนวน 81, 9 และ 10 ราย ตามลำดับ นอกจากนี้ยังพบว่าตัวอย่างของผู้ป่วยและกลุ่มควบคุมมี inhibitor ประมาณ 20 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งสามารถแก้ไขได้โดยทำการเจือจางตัวอย่าง ส่วนการเพาะเชื้อจาก throat swab ไม่พบการเจริญของเชื้อทั้งในผู้ป่วยและในกลุ่มควบคุม จากผลการทดสอบที่ได้ พบว่า nested PCR มีความไว น่าเชื่อถือและเหมาะสมที่จะนำมาใช้ตรวจหา เชื้อ M. pneumoniae จากสิ่งส่งตรวจของผู้ป่วยอย่างรวดเร็วen
dc.format.extent953714 bytes-
dc.format.extent725635 bytes-
dc.format.extent694270 bytes-
dc.format.extent926322 bytes-
dc.format.extent775159 bytes-
dc.format.extent878724 bytes-
dc.format.extent754688 bytes-
dc.format.extent701850 bytes-
dc.format.extent933964 bytes-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.language.isoenes
dc.publisherChulalongkorn Universityen
dc.rightsChulalongkorn Universityen
dc.subjectProteinsen
dc.subjectPolymerase Chain reactionen
dc.titlePolymerase chain reaction amplification of genes encoding P1 protein and 16S rRNA for detection of Mycoplasma pneumoniaeen
dc.title.alternativeการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสเพิ่มจำนวนยีนที่ควบคุมการสร้างโปรตีน P1 และ 16s rRNA เพื่อตรวจหา Mycoplasma pneumoniaeen
dc.typeThesises
dc.degree.nameMaster of Sciencees
dc.degree.levelMaster's Degreees
dc.degree.disciplineMedical Microbiology (Inter-Department)es
dc.degree.grantorChulalongkorn Universityen
dc.email.advisorSomying.T@Chula.ac.th-
dc.email.advisorNibondh.U@chula.ac.th-
Appears in Collections:Grad - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Ajcharaporn_Sa_front.pdf931.36 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch1.pdf708.63 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch2.pdf678 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch3.pdf904.61 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch4.pdf756.99 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch5.pdf858.13 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch6.pdf737 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_ch7.pdf685.4 kBAdobe PDFView/Open
Ajcharaporn_Sa_back.pdf912.07 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.