การพัฒนาชุดตรวจสอบคลอแรมเฟนิคอลโดยวิธีเอนไซม์ลิงค์อิมมูโนซอร์เบนต์แอสเสย์

Abstract

คลอแรมเฟนิคอลเป็นยาปฏิชีวนะชนิดหนึ่งที่ถูกใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษาการติดเชื้อในสัตว์ การใช้คลอแรมเฟนิคอลอย่างไม่ถูกต้องอาจส่งผลให้เกิดการตกค้างในเนื้อสัตว์หรือผลิตภัณฑ์จากสัตว์ซึ่งส่งผลกระทบโดยตรงต่อสุขภาพของผู้บริโภค จากเหตุผลดังกล่าวจึงมีการห้ามใช้คลอแรมเฟนิคอลในสัตว์ที่นำมาเป็นอาหาร ดังนั้นการตรวจหาคลอแรมเฟนิคอลที่ตกค้างในอาหารจึงเป็นสิ่งจำเป็น ในการวิจัยนี้ได้ทำการพัฒนาชุดตรวจสอบคลอแรมเฟนิคอลต้นแบบโดยวิธี indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) ความเข้มข้นที่เหมาะสมของแอนติเจน (คลอแรมเฟนิคอลเชื่อมกับโปรตีน BSA) สำหรับเคลือบจานชนิด 96 หลุมและแอนติบอดีที่จำเพาะต่อคลอแรมเฟนิคอล คือ 0.1 และ 1 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ ชุดตรวจสอบต้นแบบที่พัฒนาขึ้นสามารถใช้วัดปริมาณคลอแรมเฟนิคอลในช่วง 0.3 นาโนเมตรต่อมิลลิลิตรถึง 20 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ค่าร้อยละของสัมประสิทธิ์ความแปรปรวน (%CV) ของ intra-assay และ inter-assay อยู่ในช่วง 2.5-16.4% และ 3.5-22.9% ตามลำดับ นอกจากนั้นค่าเฉลี่ยของเปอร์เซ็นการค้นพบคลอแรมเฟนิคอลที่เติมลงไปในสารละลายบัฟเฟอร์และเนื้อกุ้งบดที่ความเข้มข้นต่างๆ เท่ากับ 106 และ 97 ตามลำดับซึ่งใกล้เคียงกับค่าที่ได้จากการวัดด้วยชุดตรวจสอบสำเร็จรูปที่มีจำหน่ายที่ใช้ในการวิจัยนี้และวิธี LC-MS-MS