Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/23913
| Title: | ภาวะเหมาะสมในการสร้างผักบุ้ง Ipomoea aquatica ดัดแปลงพันธุ์โดยวิธีการใช้ Agrobacterium tumefaciens |
| Other Titles: | Opimal conditions for the construction of transgenic pakbung Ipomoea aquatica via Agrobacterium tumefaciens |
| Authors: | กิตติมา คำหว่าน |
| Advisors: | อัญชริดา อัครจรัลญา |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ |
| Issue Date: | 2545 |
| Publisher: | Chulalongkorn University |
| Abstract: | ภาวะที่เหมาะสมในการสร้างผักบุ้ง lpomoea aquatica ดัดแปลงพันธุ์โดยวิธีการใช้ Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ EHA101 ที่มีพลาสมิด pBIH1-IG(SX) ซึ่งมียีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสเป็นยีนรายงานผล ยีนต้านต่อสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซินและยีนต้านต่อกานามัยซินเป็นยีนคัดเลือก เป็นดังนี้ ใช้เชื้อ A. tumefaciens สายพันธุ์ EHA101 ที่มี พลาสมิด pBIH1-IG(SX) ซึ่งเจริญในระยะ late log phase (24 ชั่วโมง) ความเข้มข้นเซลล์ของ A. tumefaciens 9.0 x 106 เซลล์ต่อมิลลิลิตร เติมอะซิโตไซริงโอนความเข้มข้นสุดท้าย 50 ไมโครโมลาร์ในขั้นตอน cocultivation และบ่มเชื้อ A. tumefaciens ร่วมกับ cotyledon explants ของผักบุ้งอายุ 7 วัน เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ที่ภาวะเหมาะสมประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนซึ่งตรวจสอบจากการแสดงออกของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสใน cotyledon explants หลังขั้นตอนการ cocultivation มีค่าเท่ากับ 75 เปอร์เซ็นต์ ต้นผักบุ้งทรานสฟอร์แมนท์มีการแสดงออกของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสที่ใบ ลำต้นและราก เมื่อตรวจสอบด้วยวิธี histochemical GUS assay การตรวจสอบยืนยันการมีอยู่ของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดส และยีนต้านต่อสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซิน โดยวิธี PCR พบว่ามียีนทั้งสองสอดแทรกในโครโมโซมของผักบุ้งพันธุ์ทรานสฟอร์แมนท์จริง |
| Other Abstract: | Optimal conditions for the construction of transgenic Pakbung (lpomoea aquatica) via Agrobacterium tumefaciens using A. tumefaciens EHA101 harbouring plasmid pBIH1-IG(SX) having β-glucuronidase gene as a reporter gene, hygromycin phosphotransferase gene (hygromycin resistance gene) and neomycin phosphotransferase II gene (kanamycin resistance gene) as selectable marker genes were as followed: late log phase cells (24 hours culture) of A. tumefaciens at 9.0 x 106 cells/ml. cocultivated with 7-days old l. aquatica cotyledon explants in the presence of 50 β-glucuronidase activity. By histochemical GUS assay, expression of β-glucuronidase was detected in leave, shoot and root of transgenic l. aquatica. The existence of β-glucuronidase and hygromycin phosphotransferase genes in the chromosomal DNA of transgenic l. aquatic were confirmed by PCR method. |
| Description: | Thesis (M.Sc.)--Chulalongkorn University, 2002 |
| Degree Name: | วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต |
| Degree Level: | ปริญญาโท |
| Degree Discipline: | จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/23913 |
| ISBN: | 9741709226 |
| Type: | Thesis |
| Appears in Collections: | Sci - Theses |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Kittima_kh_front.pdf | 2.18 MB | Adobe PDF | View/Open | |
| Kittima_kh_ch1.pdf | 5.03 MB | Adobe PDF | View/Open | |
| Kittima_kh_ch2.pdf | 1 MB | Adobe PDF | View/Open | |
| Kittima_kh_ch3.pdf | 3.16 MB | Adobe PDF | View/Open | |
| Kittima_kh_ch4.pdf | 4.16 MB | Adobe PDF | View/Open | |
| Kittima_kh_ch5.pdf | 1.92 MB | Adobe PDF | View/Open | |
| Kittima_kh_back.pdf | 4.06 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.