การตรวจหา Escherichia coli O157:H7 ในเนื้อดิบโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส

Abstract

การพัฒนาวิธีที่รวดเร็วสำหรับการตรวจหา Escherichia coli O157:H7 โดยวิธี Multiplex PCR การตรวจหาปัจจัยความรุนแรงที่สำคัญของสายพันธุ์นี้คือ vt ซึ่งประมวลรหัสวีโรทอกซิน และ rfbO157 ซึ่งประมวลรหัสการสร้าง O-แอนติเจนด้วยโอลิโกนิวคลีโอไทด์ไพร์เมอร์สองคู่ Multiplex PCR แสดงผลิตภัณฑ์ 2 ขนาดคือ 215 bp ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ของ vt และ 420 bp ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ของ rfbcO157 ตามลำดับภาวะที่เหมาะสมในการตรวจหาสายพันธุ์บริสุทธิ์ โดย Multiplex PCR คือใช้ อุณหภูมิ annealing 55 °ซ และ MgCI2 3.0 มิลลิโมลาร์ตามลำดับ วิธีนี้สามารถตรวจหาสายพันธุ์ O157:H7 ด้วยความไวที่มีเชื้อ ประมาณ 105 CFU ต่อมิลลิลิตร และไม่เกิดผลิตภัณฑ์ PCR จากแบคทีเรียก่อโรคอื่น 15 ชนิด นอกจาก Shigella dysenteriae type 1 Multiplex PCR ยังสามารถใช้เพื่อตรวจหา E. coli O157:H7 ที่เติมในเนื้อดิบ หลังการบ่มเนื้อดิบ 25 กรัมใน tryptic soy broth ที่ 37 °ซ เป็นเวลา 8 ชั่วโมง Multiplex PCR ที่มีการเติม 100 ไมโครกรัม bovine serum albumin สามารถแสดงผลิตภัณฑ์ PCR 2 ขนาดที่จำเพาะลำหรับ E. coli O157:H7 Multiplex PCR ที่ได้รับการดัดแปลงนี้เป็นวิธีที่รวดเร็วและใช้สำหรับคัดกรองในการตรวจ E. culi O157:H7 ทีมความไวและจำเพาะและสามารถใช้เป็นทางเลือกเพื่อการบ่งชี้สายพันธุ์ O157 ในตัวอย่างเนื้อดิบแทนวิธีที่ใช้กันทั่วไป