การผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี้ที่มีความจำเพาะต่อโปรตีน ของระบบมัลติดรักซ์อิฟรักซ์ในเชื้อสูโดโมนาส แอรูจิโนซา : รายงานผลการวิจัย

Abstract

ระบบ Multidrug efflux systems ได้แก่ MexAB-OprM, MexCD-OprJ, MexEF-OprN และ MexXY เป็นกลไกสำคัญของการดื้อต่อยาหลายชนิดพร้อมกันในสูโดโมนาส แอรูจิโนซา ในการวิจัยครั้งนี้ได้ผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี้ต่อ OprM OprN และ OprJ เพื่อใช้ตรวจการแสดงออกของระบบด้วยเทคนิค Western blot analysis โดยฉีดกระตุ้นภูมิคุ้มกันในกระต่ายด้วยเปปไตด์สังเคราะห์ ทำการทดสอบคุณภาพของไฮเปอร์อิมมูนซีรั่มด้วยการทำ Western blot โดยใช้โปรตีนที่เตรียมได้จากเชื้อที่มีและไม่มีการแสดงออกของระบบที่เกี่ยวข้องเป็นตัวควบคุมบวกและตัวควบคุมลบ จากผลการวิจัยพบว่าโพลีโคลนอลแอนติบอดี้ที่ผลิตได้สามารถใช้ตรวจหาการแสดงออกของ OprM OprN และ OprJ ในการทดสอบปฏิกิริยาข้าม พบว่า OprJ polyclonal antibody ให้แถบขนาดประมาณ 53 Mda ต่อโปรตีนจาก OCR1 และ PAO7H ควรศึกษาเพิ่มเติมว่าเป็นปฏิกิริยาข้ามกับ OprM และ OprN จริงหรือไม่ รวมทั้งควรมีการสกัดโพลีโคลนอลแอนติบอดีให้บริสุทธิ์เพื่อเพิ่มความเข้มข้นและความจำเพาะ นอกจากนี้ได้สร้าง delta(mexXY) null mutant ที่สามารถใช้เป็นตัวควบคุมลบสำหรับการทดสอบการแสดงออกของ MexX ได้อย่างมีประสิทธิภาพ