การผลิตและลักษณะสมบัติของทอกซินจาก Bacillus sp. สายพันธุ์ F2.2 ที่มีผลฆ่ายีสต์

Abstract

จากการคัดเลือกจุลินทรีย์ที่ผลิตทอกซินจากตัวอย่างอาหารหมักดอง ผักและผลไม้ เพื่อดูความสามารถในการฆ่าจุลชีพอื่น ๆ พบว่า แบคทีเรีย F2.2 ซึ่งจัดอยู่ในกลุ่มของ Bacillus sp. มีความสามารถในการฆ่าจุลชีพอื่นๆ ได้อย่างกว้างขวาง โดยเฉพาะยีสต์เมื่อทำการศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตทอกซินในขวดเขย่าขนาด 250 มิลลิลิตร พบว่าจุลินทรีย์นี้จะปลดปล่อยทอกซินออกมาในปริมาณสูงเมื่อเลี้ยงในอาหารวายอีพีดี ที่มีกลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน มีเปปโตนเป็นแหล่งไนโตรเจนและมีผงสกัดยีสต์เป็นแหล่งเกลือแร่และวิตามิน ค่าความเป็นกรด-ด่างเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อเท่ากับ 5.0 และบ่มที่อุณหภูมิ 30 °ซ. อัตราการเขย่า 200 รอบต่อนาที เป็นเวลา 3 วัน สำหรับสภาวะที่เหมาะสมในการออกฤทธิ์ของทอกซินพบว่า หากบ่มทอกซินร่วมกับจุลินทรีย์ทดสอบที่อุณหภูมิ 25 °ซ. ค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 6.0 เป็นเวลา 14 ชั่วโมง จะให้ค่าการออกฤทธิ์ดีที่สุด การทำทอกซินกึ่งบริสุทธิ์ กระทำโดยการตกตะกอนด้วยกรดไฮโดรคลอริกแล้วสกัดแยกสารด้วยบิวทานอล นำส่วนสกัดไปทำให้บริสุทธิ์โดยการทำโครมาโตรกราฟีอย่างต่อเนื่องบนซิลิกาเจล, ดีอีเออี-เซฟาเด็กซ์ เอ-50 และเซฟาเด็กซ์ จี-75 เมื่อนำทอกซินที่ผ่านกระบวนการดังกล่าวไปตรวจสอบด้วย HPLC ปฏิภาคกลับโดยใช้คอลัมน์ LichroCART 2504(100 RP-13) พบว่า จำนวนพีคที่ปรากฏในโครมาโตรแกรมลดลงเมื่อเทียบกับตัวอย่างเริ่มต้นที่ผ่านการตกตะกอนด้วยกรดไฮโดรคลอริก อันเป็นเครื่องบ่งว่า ทอกซินมีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น