Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/8216
| Title: | การสร้าง E.Coli ที่สามารถผลิตโปรตีนหลักรอยัลเจลลี ของผึ้งด้วยการโคลนดีเอ็นเอ : รายงานผลการวิจัย |
| Authors: | ศิริพร สิทธิประณีต |
| Email: | ssiriporn@netserv.chula.ac.th |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ |
| Subjects: | ผลิตภัณฑ์ผึ้ง นมผึ้ง ผึ้งโพรง |
| Issue Date: | 2547 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | ได้โคลน cDNA ของ Major Jelly Protein ของผึ้งโพรง Apis cerana (AcMRJP) โดยใช้ผลิตภัณฑ์จาก TR-PCR หลังศึกษาสมบัติเฉพาะพบว่าได้โคลนของ MRJP1 และ MRJP2 โดย Open Reading Frames (ORF) ของ AcMPJP1 และ MRJP2 มีขนาด 1302 และ 1392 นิวคลีโอไทด์ ซึ่งระบุการถอดรหัสเป็นกรดอะมิโน 433 และ 463 residues ตามลำดับ ความคล้ายคลึงของ MRCJP1 และ MRCJP2 ระหว่างผึ้งโพรงและผึ้งพันธุ์ (Apis mellifera) เป็น 93 และ 92 เปอร์เซ็นต์ สำหรับลำดับนิวคลีโอไทด์ และเป็น 90 และ 85 เปอร์เซ็นต์ สำหรับกรดอะมิโนตามลำดับ เมื่อ subclone cDNA ของ AcMRJP1 โดยใช้ expression vector, pET17b และทรานสฟอร์มเข้าสู่ E. coli Rosetta (DE3) pLys S พบการแสดงออกเพื่อผลิตโปรตีน AcMRJP1 ในรูปไม่ละลายน้ำมีขนาด 47.9 kDa การวิเคราะห์โดยใช้ Western blot แสดงว่ามีการแสดงออกให้ AcMRJP1 ใน E. coli ได้ การแสดงออกพบหลังจากชักนำด้วย IPTG เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และระดับการแสดงออกสูงสุดคงที่หลังชักนำได้ 4 ชั่วโมง การเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลวในจำนวน 1 ลิตร จะให้ผลิตผลโปรตีน AcMRJP1 ประมาณ 20 มิลลิกรัม |
| Other Abstract: | Major Royal Jelly Proteins cDNA of Apis cerana (AcMRJPcDNA) were cloned and characterized. The Open Reading Frames (ORF) of AcMRJP1 and AcMRJP2 were 1302 and 1392 nucleotides encoding 433 and 463 amino acid residues, respectively. The similarity of AcMRJP1 and MRJP2 and their homologues in Apis mellifera were 93 and 92% for nucleotide whereas 90 and 86% for deduced amino acid. The complementary DNA of AcMRJP1 was subcloned into expression vector, pET17b, and transformed into E. coli Rosetta (DE3) pLys S. Recombinant AcMRJP1 47.9 kDa was expressed as inclusion bodies. Western blot analysis revealed successful expression of recombinant AcMRJP1 after 1 hour of IPTG induction and reached saturation level aster 4 hours. The yield of purified AcMRJP1 was approximately 20 mg protein per litre of liquid culture. |
| Description: | PCR product length cDNA ของผึ้งโพรง -- ลำดับนิวคลีโอไทด์และลำดับกรดอะมิโนของ AcMRJP1, AcMRJP2 -- PRC product ที่ได้จากการสังเคราะห์ full length MRJPAcDNA ของผึ้งโพรง -- โปรตีนที่ได้จากการด้วย SDS-PAGE -- โปรตีนที่ได้จากการแยกสกัดให้บริสุทธิ์ด้วย aFFinity column และแยกขนาดด้วย SDS-PACE -- โปรตีนที่ติดตามผลด้วย Western blot -- Cloning, expression and genomic organization of genes encoding major royal jelly protein 1 and 2 of the honey bee (Apis cerana) / Champrapa Imjongjirak, Sirawut Klinbunga, Siripron Sittipraneed |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/8216 |
| Type: | Technical Report |
| Appears in Collections: | Sci - Research Reports |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| siripron_si.pdf | 4.7 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.