Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/60404
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.authorอุมาพร พิมพิทักษ์-
dc.contributor.authorทรงจันทร์ ภู่ทอง-
dc.contributor.authorกิตตินันท์ โกมลภิส-
dc.contributor.authorนันทิกา คงเจริญพร-
dc.contributor.authorอณุมาศ บัวเขียว-
dc.contributor.authorพลกฤษ์ แสงวณิช-
dc.contributor.otherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพและวิศกรรมพันธุศาสตร์-
dc.date.accessioned2018-10-05T07:56:51Z-
dc.date.available2018-10-05T07:56:51Z-
dc.date.issued2557-
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/60404-
dc.description.abstractฟูราโซลิโดน (Furazolidone ,FZD) เป็นยาในกลุ่มสารไนโตรฟูแรนที่เกษตรกรนิยมใช้ในการป้องกันและรักษาโรคเกี่ยวกับระบบทางเดินอาหารในสัตว์เพื่อการบริโภค ได้แก่ โค ,สุกร ,ไก่ ,ปลา และกุ้ง ยานี้เมื่อเข้าสู่ร่างกายจะถูกเปลี่ยนเป็นสารเมแทบอไลต์ คือ 3 – อะมิโน – 2 – ออกซาโซลิดิโนน (3-amino-2-oxazolidinone ,AOZ) ติดกับเนื้อเยื่อ อาจเป็นสารก่อมะเร็งและก่อให้เกิดกลายพันธุ์ งานวิจัยนี้ได้ทำการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อสาร AOZ หรือ สารอนุพันธ์ NPAOZ ซึ่งเป็นรูปสารสำหรับการตรวจหาสารตกค้างในเนื้อสัตว์ โดยการฉีดกระตุ้นหนูทดลองด้วยอนุพันธ์ CPAOZ ที่เชื่อมต่อด้วย cBSA (CPAOZ-cBSA) และ AOZ ที่เชื่อมต่อกับ BSA (AOZ-BSA) จากผลการทดลองที่ได้ พบว่า CPAOZ-cBSA เหมาะสมที่จะใช้เป็นแอนติเจนในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลองมากกว่า AOZ-BSA เพราะสามารถผลิตไฮบริโดมาโคลนที่ผลิตแอนติบอดี ซึ่งมีความสามารถในการจับกับสาร NPAOZ ,CPAOZ และ FZD ในรูปอิสระได้ จากการคัดเลือกไฮบริโดมาเซลล์โคลนที่ผลิตแอนติบอดีต่อสาร NPAOZ มีจำนวน 8 โคลน ได้แก่ เซลล์จากหลุมต้น 8/12D หมายเลข 75 ,79 ,89 และ 181 โคลนจากเซลล์หลุมต้น 6/6E หมายเลข 96 ,102 ,109 และ 112 มีค่าความไวในการจับกับสาร NPAOZ โดยมีค่า IC50 เท่ากับ 5.17 ,4.87 ,6.38 ,3.87 ,10.49 ,10.27 ,11.46 และ 11.83 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ แอนติบอดีที่ได้สามารถจับกับ FZD และ CPAOZ ในรูปอิสระได้ จากการศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนที่ได้โดยตรวจสอบไอโซไทป์ ทดสอบความไว ทดสอบความจำเพาะและการเกิดปฏิกิริยาข้าม พบว่าแอนติบอดีที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 8/12D และ 6/6E มีไอโซไทป์ เป็นชนิด IgG1 และ IgG2b ตามลำดับ โคลนที่มีความไวสูงสุดต่อสาร NPAOZ คือ 181 และ 102 โดยสามารถจับกับ CPAOZ และ FZD ในรูปอิสระได้ ไม่พบการเกิดปฏิกิริยาข้ามกับสารไนโตรฟูแรนตัวอื่นๆ และยาปฏิชีวนะตัวอื่นๆที่ใช้ทดสอบ แอนติบอดีจากโคลน 181 และ 102 ที่บริสุทธิ์แล้ว ได้แอนติบอดีที่ได้จากโคลน 181 มีความไวต่อสารอิสระ CPAOZ NPAOZ และ FZD สูงสุดโดยให้ค่า IC50 เป็น 0.34 17.66 และ 0.13 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตรตามลำดับมีค่า LOD เป็น 0.06 3.86 และ 0.04 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตรตามลำดับ จึงสามารถสรุปได้ว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้มีความจำเพาะต่อ NPAOZ ที่มีศักยภาพในการนำไปใช้พัฒนาชุดตรวจสอบสารตกค้างได้en_US
dc.description.abstractalternativeFurazolidone (FZD) is a nitrofuran drug which is widely used in prevention and treatment of animals such as cattle, swine, chicken, fish and shrimp, for consumption. When FZD enters the body, it is metabolized to 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ) which attached to the tissue and is considered to be a carcinogen and mutagen. In this research, monoclonal antibody against AOZ or its nitrophenyl derivative (NPAOZ) which is the stabilized form for residue detection was produced. Immunization of mice was performed by using both carboxyphenyl derivative conjugated to cationized bovine serum albumin (CPAOZ-cBSA) and AOZ-BSA as the antigens. The results indicated that CPAOZ-cBSA was better than AOZ-BSA because it could induce hybridomas which produce antibodies with binding ability to NPAOZ, CPAOZ and FZD. After screening, eight hybridomas which produce antibody against NPAOZ were selected. Four hybridoma clones were obtained from the originated well no. 8/12D and were assigned as no. 75, 79, 89 and 181 while the others (assigned as no. 96, 102, 109 and 112) were obtained from the well no. 6/6E. Their sensitivities to NPAOZ in the term of 50 percent inhibition concentration were 5.1, 4.9, 6.4, 3.9, 10.5, 10.3, 11.5 and 11.8 ng/ml, respectively. Antibody from each clone cross-reacted to FZD and CPAOZ. The isotype of antibody from well no. 8/12D and 6/6E was found to be IgG1 and IgG2b, respectively. Monoclonal antibodies from clone no. 181 and 102 were highly specific for NPAOZ, CPAOZ and FZD, and did not cross react with other nitrofurans and other antibiotics tested. The purified antibody from clones 181 gave higher sensitivity to free antigen CPAOZ, NPAOZ and FZD with the IC50 value of 0.34 17.66 and 0.13 ng/ml and the LOD value of 0.06 3.86 and 0.04 ng/ml, respectively. In conclusion monoclonal antibodies were generated which show specificity for NPAOZ and have a potential to be used in the development of immunoassay-based test kit for NPAOZ detection.en_US
dc.description.sponsorshipทุนอุดหนุนการวิจัยจากเงินอุดหนุนทั่วไปจากรัฐบาล ประจำปีงบประมาณ 2556- 2557en_US
dc.language.isothen_US
dc.publisherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen_US
dc.rightsจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen_US
dc.subjectโมโนโคลนอลแอนติบอดีย์en_US
dc.subjectไนโตรฟูแรนen_US
dc.subjectปฏิชีวนะตกค้างen_US
dc.subjectการปนเปื้อนในอาหารen_US
dc.subjectMonoclonal antibodiesen_US
dc.subjectNitrofuransen_US
dc.subjectAntibiotic residuesen_US
dc.subjectFood contaminationen_US
dc.titleการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อ 3-อะมิโน-2-ออกซาโซลิดิโนนen_US
dc.title.alternativeProduction of monoclonal antibody against 3-amino-2-oxazolidinoneen_US
dc.typeTechnical Reporten_US
dc.email.authorUmaporn.P@Chula.ac.th-
dc.email.authorSongchan.P@Chula.ac.th-
dc.email.authorKittinan.K@Chula.ac.th-
dc.email.authorNanthika.K@Chula.ac.th-
dc.email.authorAnumart.B@Chula.ac.th-
dc.email.authorPolkit.S@Chula.ac.th-
Appears in Collections:Biotec - Research Reports

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Umaporn P_Res_2557.pdfFulltext1.56 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.