Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/78998
| Title: | การก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งของยีน Malonyl-Coenzyme A Reductase (MCR) เพื่อการผลิต 3 hydroxypropionate (MCR) ในยีสต์ Kamagatella pastoris ATCC 204164 |
| Other Titles: | Site-directed mutagenesis of Malonyl-Coenzyme A Reductase (MCR) gene to produce 3-hydroxypropionate (3-HP) in Kamagatella pastoris ATCC 204164 |
| Authors: | พีระพรรณ คัมภิโร |
| Advisors: | ชมภูนุช กลิ่นวงษ์ |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ |
| Subjects: | กรดอินทรีย์ -- การสังเคราะห์ จุลินทรีย์ -- การกลายพันธุ์ Organic acids -- Synthesis Microbial mutation |
| Issue Date: | 2563 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | 3-Hydroxypropionic acid หรือ 3-Hydroxypropionate (3-HP) เป็นกรดอินทรีย์ที่ใช้ใน การผลิตสารเคมีและสารอนุพันธ์ ซึ่งนิยมใช้ในอุตสาหกรรมที่สำคัญ แต่วิธีการสังเคราะห์ผ่าน กระบวนเคมีของ 3-HP ได้ผลน้อย ไม่คุ้มต้นทุน และมีผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อม ในงานวิจัยนี้จึงใช้ กระบวนการชีวสังเคราะห์ในการผลิต 3-HP ผ่านวิถี malonyl-CoA ใน Kamagatella pastoris ทีถูกก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งของยีน malonyl-Coenzyme A reductase (mcr) ตำแหน่ง S1114K โดยมีการวิเคราะห์ codon usage ของยีน MCR สำหรับการแสดงออกใน K. pastoris จากนั้นสังเคราะห์ยีน mcr เพื่อการก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งโดยอาศัยหลักการทำพีซีอาร์ แล้วจึงสังเคราะห์เวคเตอร์ที่ประกอบไปด้วยยีนกลายของ mcr เข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน K. pastoris และทดสอบความสามารถในการผลิต 3-HP ด้วย Gas Chromatography จากผลการทดลอง พบว่า การใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบเฉพาะร่วมกับการใช้ KOD Plus Mutagenesis Kit สามารถ สังเคราะห์การกลายที่สองตำแหน่งของการกลายที่อยู่ข้างกันได้สมบูรณ์ อัตราการเกิดการกลาย ถูกต้องหลังจากเข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน Escherichia coli แม่นยำตามตำแหน่งที่ความถูกต้องทุกลำดับ เบสนิวคลิโอไทด์ที่สังเคราะห์การกลายในส่วนการนำยีนกลาย mcr เข้าสู่ K. pastoris และการ ผลิต 3-HP จะมีการดำเนินการในอนาคต |
| Other Abstract: | 3-Hydroxypropionic acid or 3-Hydroxypropionate (3-HP) is an organic acid used in the manufacture of chemicals and derivatives which is commonly used in important industries. The 3-HP chemical synthesis method is low yield, not cost-effective, and impacts the environment. In this study, biosynthesis was used to produce 3-HP via the malonyl-CoA pathway by inducing site-directed mutation on malonyl Coenzyme A reductase (mcr) gene that affected production 3-hydroxypropionate (3-HP) in Kamagatella pastoris. The codon usage of mcr gene for expression in K. pastoris was synthesized for location-specific mutation S1114K based on PCR principles. The vector containing the mcr gene will be transformed into the host cell K. pastoris and investigated for 3-HP production by Gas Chromatography. From the results of the experiment, it was found that using a specially designed primer in conjunction with the use of the KOD Plus Mutagenesis Kit shown the two positions of the adjacent mutagenesis, can be completely synthesized. Correct incidence after entering the host cell Escherichia coli was precisely positioned at the correctness of all nucleotide sequences that were synthesized. However, transformed K. pastoris with mcr mutant gene and 3-HP production analysis will be performed in the future. |
| Description: | โครงงานเป็นส่วนหนึ่งของการศึกษาตามหลักสูตรปริญญาวิทยาศาสตรบัณฑิต สาขาวิชาพันธุศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย ปีการศึกษา 2563 |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/78998 |
| Type: | Senior Project |
| Appears in Collections: | Sci - Senior Projects |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| 63-SP-GENE-002 - Peeraphan Compiro.pdf | 1.6 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.